Определение билирубин в моче
Моча здоровых людей содержит минимальные количества билирубина, которые не обнаруживаются качественными пробами, применяемыми в практике.
Большинство из них основано на превращении билирубина под действием окислителей в зеленый биливердин или пурпурно-красные билипуррины, которые в смеси с биливердином дают синее окрашивание.
Унифицированная проба Фуше
Реактивы: 1) 15% раствор хлорида бария (ВаСl2); 2) реактив Фуше: 25 г ТХУ растворяют в 100 мл дистиллированной воды и приливают 10 мл 10 % раствора хлорида железа (III) (FeCl3).
Ход определения. В пробирку наливают 10 мл мочи, добавляют 5 мл 15% раствора хлорида бария, смешивают, фильтруют. На вынутый из воронки фильтр, предварительно расправленный в чашке Петри, наносят 2 капли реактива Фуше.
Оценка результатов. При наличии в моче билирубина на фильтре появятся сине-зеленые пятна.
Примечание. Щелочную мочу предварительно подкисляют несколькими каплями уксусной кислоты.
Унифицированная проба Розина
Реактив. 1 % спиртовой раствор йода.
Ход определения. В пробирку наливают 4–5 мл мочи и по стенкам осторожно наслаивают раствор йода. О наличии билирубина свидетельствует появление на границе между жидкостями зеленого кольца.
Проба Готфрида
Принцип метода. Глюкурониды билирубина при реакции с диазотированной сульфаниловой кислотой (диазобензосульфоновая кислота) дают розовую окраску за счет образования билирубина.
Реактивы. 1) 10% раствор хлорида бария (ВаСl2); 2) диазореактив: а) реактив 1: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в небольшом количестве воды, прибавляют 15 мл концентрированной соляной кислоты (НСl) и доводят дистиллированной водой до 1 л; б) реактив 2: 0,5% раствор нитрата натрия (NaNO3). Непосредственно перед исследованием 10 мл раствора 1 смешивают с 0,25 мл раствора 2; 3) 96% этиловый спирт; 4) 6% раствор гидрофосфата натрия (Na2HPO4).
Ход определения. В пробирку вносят 10 мл мочи, подкисляют несколькими каплями уксусной кислоты, прибавляют 5 мл 10% раствора хлорида бария, фильтруют через бумажный фильтр. Фильтр раскладывают на дне чашки Петри и на осадок наносят 1–2 капли диазореактива, 4 капли спирта и 1 каплю гидрофосфата натрия.
Оценка результатов. При наличии в моче билирубина осадок окрашивается в красно-фиолетовый цвет.
Принцип определения билирубина, описанный в пробе Готфрида, взят за основу в экспресс-тестах, выпускаемых рядом зарубежных фирм.
Клиническое значение. Билирубинурия наблюдается главным образом при поражении паренхимы печени (паренхиматозные желтухи) и при механических затруднениях оттока желчи (обтурационные, механические желтухи), сопровождающихся увеличением содержания билирубина в крови. При гемолитической желтухе реакция на билирубин в моче отрицательна, что имеет диагностическое значение при дифференциальной диагностике желтух.
