Анализ крови

Непосредственным объектом гематологии как науки является система крови, которая состоит из кроветворных органов (костный мозг, селезенка, лимфатические узлы) и периферической крови. Если раньше круг деятельности гематолога ограничивался изучением морфологии клеточного состава периферической крови, костного мозга и лимфатических узлов, то в настоящее время сюда входит и исследование иммунной системы организма.

Кровь представляет собой жидкость сложного состава — плазму, в которой суспензированы форменные элементы: эритроциты (Red Blood Cells, RBCs — красные кровяные клетки), лейкоциты (White Blood Cells, WBCs — белые кровяные клетки) и тромбоциты (Platelets, Pits). При коагуляции крови после отделения сгустка остается жидкость, которая называется сывороткой. В периферической крови в норме содержатся зрелые клеточные элементы. Незрелые предшественники находятся в органе кроветворения — красном костном мозге.

Из методов количественного и качественного исследования форменных элементов крови наиболее распространен общеклинический анализ крови: определение концентрации гемоглобина, цветового показателя, содержания эритроцитов, лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, описание особенностей морфологической картины клеток крови, оценка скорости оседания эритроцитов (СОЭ). При наличии изменений данных показателей дополнительно определяют количество ретикулоцитов и тромбоцитов. Эти исследования проводят всем стационарным больным. В амбулаторных условиях нередко ограничиваются недостаточно информативным определением «тройки»: количества гемоглобина, лейкоцитов и СОЭ. Клинический анализ периферической крови является одним из важнейших лабораторных тестов и иногда дает возможность сразу определить направление диагностического поиска (например, при появлении бластов в формуле крови или наличии гиперлейкоцитоза с абсолютным лимфоцитозом, тельцами Гумпрехта). На основании клинического анализа крови трудно судить о гемопоэзе в целом. Более полное представление дает параллельное изучение костного мозга (цитологическое, цитохимическое и цитогенетическое).

При патологических состояниях гематологические изменения варьируют в зависимости от тяжести процесса, стадии заболевания и наличия осложнений, сопутствующей патологии, проводимой терапии. Необходимо учитывать, что изменения лабораторных показателей (например, количества лейкоцитов и формулы крови) наблюдаются не только при патологических состояниях, но и при проведении некоторых диагностических процедур, изменении физиологического статуса организма (смена климата, время суток, возраст, физические нагрузки, гормональный фон).

Взятие и обработка крови

Исследование рекомендуется проводить утром натощак или через 1 ч после легкого завтрака. Исследуют, главным образом, капиллярную кровь, можно использовать венозную кровь (также взятую натощак). Не рекомендуется брать кровь после физической и умственной нагрузки, применения лекарственных препаратов, особенно при внутривенном или внутримышечном их введении, воздействия рентгеновских лучей и после физиотерапевтических процедур. В экстренных случаях этими правилами пренебрегают. Повторные исследования целесообразно производить в одни и те же часы, так как морфологический состав крови подвержен колебаниям на протяжении суток.

Все необходимые исследования, а также приготовление мазков крови следует выполнять как можно скорее. При невозможности быстрого проведения исследований образец крови, тщательно перемешанной с антикоагулянтом, помещают в холодильник при 4 °С. Перед взятием крови из контейнера или пробирки ее осторожно перемешивают неоднократным перевертыванием для исключения возможных погрешностей.

Реактивы:

  1. 5% раствор цитрата натрия (C6H5O7Na3· 5H2O); хранится 1—2 нед, помутневший раствор к употреблению негоден;
  2. Трансформирующий раствор (ацетонциангидрин — 0,5 мг; калий железосинеродистый (красная кровяная соль, K3(Fe(CN)6) — 0,2 г; натрия гидрокарбонат (NaHCO3) — 1 г; дистиллированная вода — до 1 л;
  3. Изотонический раствор (0,9%) натрия хлорида или реактив Гайема: хлорид ртути II (HgCl2) — 0,5 г; сульфат натрия (Na2SO4) — 5 г; натрия хлорид (NaCl) — 1 г; вода дистиллированная — до 200 мл);
  4. 3—5% раствор уксусной кислоты;
  5. 14% раствор сульфата магния;
  6. 6% раствор ЭДТА;
  7. 1% раствор оксалата аммония (NH4C2O4);
  8. Спирт этиловый;
  9. 3—5% спиртовой раствор йода.

Оборудование:

  1. копья для прокола пальца (одноразовые);
  2. пробирки;
  3. пипетки вместимостью 0,02 мл стерильные;
  4. капилляры от аппарата Панченкова стерильные;
  5. предметные стекла;
  6. шлифованные стекла.

Взятие капиллярной крови

Капиллярную кровь получают с помощью прокола: 1) мочки уха; 2) мякоти концевых фаланг пальцев рук; 3) у новорожденных и детей раннего возраста — подошвенной поверхности пятки или большого пальца ноги. Прокол должен быть глубиной около 3—4 мм. Не следует брать кровь из воспаленных или поврежденных участков. Если место предполагаемого прокола холодное или цианотичное, его предварительно согревают массированием или погружением конечности в теплую воду, иначе могут быть получены ошибочные результаты. Кожу обрабатывают 70% этиловым спиртом или специальным антисептическим раствором, дают высохнуть и затем прокалывают. Первую каплю снимают ватным тампоном, выдавливать кровь не рекомендуется. Чтобы получить достаточное количество крови, осуществляют легкий нажим с помощью стерильного тампона.

Для определения числа эритроцитов и лейкоцитов используется пробирочная (безмеланжерная) методика Н. М. Николаева (1954).

Для подсчета числа эритроцитов берут 0,02 мл крови и разводят в пробирке 4 мл 0,9% раствора натрия хлорида (разведение в 200 раз).

Для подсчета количества лейкоцитов также берут 0,02 мл крови и разводят в пробирке 0,4 мл 3-5% раствора уксусной кислоты, подкрашенного несколькими каплями раствора метиленового синего (для окраски ядер лейкоцитов). Тщательно перемешивают. Уксусная кислота гемолизирует эритроциты.

Для определения концентрации гемоглобина в сухую стерильную пипетку набирают 0,02 мл крови и разводят ее в пробирке с трансформирующим раствором (5 мл), перемешивают.

Для определения СОЭ в капилляр от аппарата Панченкова, промытый 5% раствором цитрата натрия, набирают кровь до метки (100 делений) и тщательно выдувают ее в пробирку с подготовленным 5% раствором цитрата натрия (соотношение крови и реактива 4:1), пробирку встряхивают. Время взятия крови записывают.

Для подсчета количества ретикулоцитов можно проводить окраску препарата непосредственно на стекле или в пробирке. Используют унифицированную методику подсчета количества ретикулоцитов. На подготовленное предметное стекло с одним из красителей (бриллиантовый крезиловый синий, азур I или II) наносят каплю крови, готовят тонкий мазок. Для окраски в пробирке в рабочий раствор бриллиантового крезилового синего (5 капель) добавляют 0,04 мл крови, тщательно, но осторожно перемешивают и через 30 мин готовят тонкие мазки.

Количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов можно определять унифицированной методикой Фонио в окрашенных мазках крови. Капилляром Панченкова берут реактив (14% раствор сульфата магния или 6% раствор ЭДТА) до метки «75» и смешивают с кровью, взятой тем же капилляром, до метки «0». Перемешивают, готовят мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому–Гимзе. Существует также унифицированная методика подсчета тромбоцитов в счетной камере. К 4 мл 1 % раствора оксалата аммония добавляют 0,02 мл крови, перемешивают, оставляют на 25—30 мин для гемолиза эритроцитов.

Для исследования лейкоцитарной формулы, морфологии эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов готовят препараты. Наносят каплю крови на сухое обезжиренное предметное стекло и быстро готовят тонкие мазки с помощью шлифованного стекла.

В настоящее время в связи с появлением гематологических автоматических анализаторов стали шире использовать для общего клинического анализа венозную кровь, которую берут либо в специальные пластиковые пробирки одноразового пользования с порошком ЭДТА, либо в стеклянные пробирки с другим антикоагулянтом. Сразу после взятия крови пробирку закрывают пробкой и несколько раз тщательно перемешивают кровь, не взбалтывая, что позволяет избежать образования сгустков, наличие которых искажает результаты.

Взятие венозной крови

Пациенту объясняют характер предстоящей процедуры. Осматривают его вены, при необходимости используя жгут. Берут шприц емкостью, соответствующей количеству крови, необходимому для анализа. Игла должна быть меньше 22 размера, от 2,5 до 4 см длиной. На плечо накладывают «венозный» жгут. Вместо жгута можно использовать манжету сфигмоманометра под давлением, средним между систолическим и диастолическим у данного пациента. Пациента просят сжать и разжать несколько раз кулак. Тщательно обрабатывают кожу в месте предполагаемого забора (обычно локтевая вена на внутренней поверхности локтевого сгиба) 70 % этиловым спиртом или другим антисептическим раствором и пунктируют вену. Иногда в сосуд сразу попасть не удается, в таком случае прокалывается кожа вблизи вены, а затем пунктируется вена. В тот момент, когда игла попадает в вену, кровь поступает в шприц. Если кровь не получена, иглу подтягивают на себя, и кровь обычно начинает течь в шприц. Жгут ослабляют и просят пациента разжать кулак. После процедуры, легко нажимая кусочком стерильной ваты, вытирают место укола. Прежде чем отпустить пациента, убеждаются, что кровотечение прекратилось. У грудных детей кровь может быть получена из бедренной или наружной яремной вены. Кровь из шприца аккуратно сливают в пробирку или специальный контейнер, предварительно сняв иглу.

В последнее время для забора как венозной, так и капиллярной крови широко используются одноразовые системы, поставляемые на рынок различными фирмами. В частности на российском рынке представлены системы взятия венозной крови Vacuette производства компании Greiner Bioone (Австрия). Всем хорошо известны современные требования к забору крови из вены. Выполняя эти требования, часто приходится сталкиваться с целым рядом сложностей: это и тромбирование крови в игле, и гемолиз, вызванный двукратным прохождением крови через иглу. При необходимости заполнить кровью несколько пробирок увеличивается длительность забора крови. Если планируется определение факторов свертывания, очень важно точно соблюдать соотношение кровь—антикоагулянт, что не всегда удается. Различные неприятности случаются также и при доставке пробирок с кровью в лабораторию: часто приходится сталкиваться с тем, что пробирка разбилась, кровь разлилась или часть крови впиталась в ватный тампон, которым закрыта пробирка. Кроме того, несмотря на то, что персонал работает в перчатках, кровь пациента может попасть на руки.

Эти и многие другие проблемы легко решаются при использовании вакуумных систем для взятия крови Vacuette. Система обеспечивает полную безопасность медицинского персонала при работе в момент взятия крови, так как полностью исключается контакт крови пациента с окружающей средой. Процедура взятия крови занимает всего 30 секунд и безболезненна для пациента. Система обеспечивает максимально точное соблюдение правил преаналитического этапа лабораторных исследований, существенно сокращая вероятность ошибочного результата. Разнообразие компонентов системы позволяет удобно и безопасно взять кровь для любых видов лабораторного анализа. Vacuette® — полностью «закрытая» вакуумная система для взятия крови из вены).

Система Vacuette® аналогична обычному шприцу, но вместо поршня используется перепад давлений, возникающий благодаря тому, что в пробирке создан вакуум. Система максимально удобна в обращении и обеспечивает полную защиту медицинского персонала от возможного заражения.

Кровь, взятая для получения сыворотки или плазмы, центрифугируется непосредственно в пробирке. Возможно также использование пробирок с гелем, который после центрифугирования отделяет сыворотку (плазму) от сгустка, полностью препятствуя обратному смешению.

Осложнения при взятии крови

Ранние осложнения: гематома и коллапс (обморок).

Избежать гематомы можно созданием в месте прокола адекватного давления, наложив тугую повязку.

В случае обморока пациента необходимо уложить на кушетку, дать понюхать раствор нашатырного спирта и вызвать врача.

Поздние локальные осложнения: тромбоз вены, иногда может развиться тромбофлебит.

Поздние общие осложнения: заражение вирусами гепатитов В и С, ВИЧ через инфицированную иглу или шприц.

Профилактика осложнений:

  • если кровотечение из места прокола трудно остановить, этому участку тела придают возвышенное положение и накладывают давящую повязку. Пациента наблюдают до тех пор, пока кровотечение не прекратится;
  • кровь для любых лабораторных исследований не рекомендуется брать из той конечности, в которую переливают кровь;
  • у больных лейкозами, агранулоцитозом и пациентов с пониженной сопротивляемостью организма (иммунодефициты) прокол пальца или мочки уха может вызвать инфекцию скорее, чем венепункция. Если для исследования все же требуется капиллярная кровь, кожу необходимо особенно тщательно обрабатывать дезинфицирующим агентом. Этиловый спирт не является средством выбора, лучше использовать специальные антисептические растворы.