Определение индикана в моче

Индикан представляет собой калиевую или натриевую соль индоксил серной кислоты, образующейся в печени при обезвреживании индола. Индол, в свою очередь, образуется в кишечнике из триптофана при гниении белков.

В моче здорового человека индикан содержится в незначительных количествах и обычными лабораторными тестами не определяется.

Проба Обермейера

Принцип метода. В результате гидролиза эфирной связи сильной кислотой индикан превращается в индоксил, который, окисляясь хлоридом железа (III), превращается в синее индиго.

Реактивы. 1) ацетат свинца [Pb(СН3СОО)2 × ЗН2O], 100 г/л раствора; 2) концентрированная соляная кислота с относительной плотностью 1,19; 3) хлорид железа (FeCl3 × 6Н2O); 4) реактив Обермейера: 0,4 г FeCl3 × 6Н2O растворяют в 100 мл концентрированной соляной кислоты; 5) хлороформ; 6) тиосульфат натрия (Na2S2O3 × 5Н2O), 200 г/л раствора.

Ход определения. В пробирку вносят 4 мл мочи, прибавляют 0,4 мл раствора ацетата свинца для осаждения желчных пигментов, солей и других веществ, мешающих реакции. Фильтруют. 1–2 мл фильтрата смешивают с равным объемом реактива Обермейера и через 5 мин добавляют 0,5–1 мл хлороформа, пробирку закрывают пробкой и осторожно перемешивают содержимое, неоднократно переворачивая пробирку. Если слой хлороформа окрашивается в синий или красный цвет, его отсасывают и добавляют к нему 2–3 капли раствора тиосульфата натрия.

Оценка результатов. После добавления раствора тиосульфата натрия окраска не исчезает — проба положительна.

Проба Яффе

Принцип метода. В результате гидролиза эфирной связи сильной неорганической кислотой индикан превращается в индоксил, который, окисляясь перманганатом калия, превращается в синее индиго.

Реактивы: 1) 2% раствор перманганата калия (КMnO4): 2 г перманганата растворяют в 98 мл дистиллированной воды; 2) концентрированная соляная кислота; 3) хлороформ (СНСl3); 4) тиосульфат натрия (Na2S2O3 × 5Н2O) кристаллический.

Ход определения. В химическую пробирку наливают 5–6 мл освобожденной от белка профильтрованной мочи, прибавляют равный объем концентрированной соляной кислоты и 2–3 мл хлороформа. К содержимому пробирки по каплям (!) добавляют 2% раствор перманганата калия (избыток перманганата приводит к окислению индиго в изатин желтого цвета). Пробирку закрывают пробкой и осторожно смешивают содержимое путем многократного (15–20 раз) ее переворачивания. При энергичном встряхивании может образоваться стойкая эмульсия, препятствующая разделению жидкости на слои. Пробирку устанавливают в штатив и через несколько минут учитывают реакцию по окраске слоя хлороформа, находящегося на дне.

Оценка результатов. При наличии индикана в моче хлороформ окрашивается в фиолетовый или синий цвет. При недостаточном добавлении перманганата калия (слабое окисление), приеме больными препаратов йода слой хлороформа окрашивается в розово-красные оттенки. Дифференцируют окраску, обусловленную приемом лекарственных средств, с помощью тиосульфатной пробы: при добавлении к пробе кристаллов тиосульфата натрия розовато-красный оттенок исчезает, окраска, зависящая от индиго, остается.

В некоторых случаях и у здоровых лиц хлороформ может окраситься в бледно-голубой цвет, что также принимают за норму.

Клиническое значение. Индикан в моче обнаруживается при непроходимости кишечника, спастических колитах, перитоните, когда создаются условия для усиления гнилостных процессов в кишечнике, а также при усиленном распаде белков в организме.