Исследование крови
α-Нафтилацетатэстераза. Методика Леффлера (Н. Loffler)
Принцип: α-Нафтил ацетат при определенной концентрации водородных ионов (pH) и температуре под влиянием неспецифических эстераз гидролизуется с образованием свободного нафтола, который с солями диазония дает различного цвета окрашивание.
Реактивы.
- 40% раствор формальдегида (формалин);
- α-нафтилацетат;
- ацетон;
- 0,1 М фосфатный буфер с pH 7,8–8,0;
- прочный синий ВВ или прочный красный ТР;
- краситель для ядер (гемалаун кислый, метиловый зеленый и др.);
- инкубационная среда: 10 мг α-нафтилацетата, растворенного в 0,2 мл ацетона; 40 мл фосфатного буфера, встряхивают до полного растворения; 50 мг соли диазония (реактив 5), встряхивают до полного растворения и фильтруют.
Ход определения. Свежеприготовленные сухие мазки фиксируют в парах формалина в течение 4 мин. Фиксированные мазки можно хранить несколько недель в холодильнике и 2 сут при комнатной температуре. Инкубируют в инкубационной среде при комнатной температуре в течение 30 мин. Промывают проточной водой 2–3 мин. Докрашивают кислым гемалауном в течение 8 мин. Промывают дистиллированной водой в течение 15 мин.
Активность фермента выявляется в виде коричнево-черных (при применении прочного синего ВВ) или красно-коричневых (при использовании прочного красного ТР) гранул в цитоплазме клеток.
Нормальные величины. В мазках периферической крови наибольшую активность α-нафтилацетатэстеразы, проявляющуюся в виде обильной мелкой зернистости, имеют моноциты. СЦК α-нафтилацетатэстеразы моноцитов у здоровых людей составляет 0,95. Около 18 % лимфоцитов обнаруживают активность фермента в виде единичных гранул в цитоплазме (Кост Е. А., 1975), но есть отдельные сообщения (Михеева А. И., 1970) о более высоком содержании фермента в лимфоцитах (43–89 %). В тромбоцитах периферической крови фермент выявляется в виде мелких гранул. В сегментоядерных нейтрофилах активность фермента ничтожно мала. Среди костномозговых элементов наибольшую ферментативную активность имеют промиелоциты, миелоциты, мегакариоциты, моноциты.
Клиническое значение. Значительное повышение активности фермента выявлено в бластах при остром промиелоцитарном лейкозе, остром монобластном лейкозе, в плазматических клетках при множественной миеломе. При остром миелобластном лейкозе активность фермента менее выражена. При хроническом лимфолейкозе активность α-нафтилацетатэстеразы в лимфоцитах резко снижена. При остром лимфобластном лейкозе активность фермента в бластах очень низкая. Снижение активности фермента в моноцитах и увеличение в лимфоцитах установлено при диффузных поражениях печени.
См. также:
