Лейкоконцентрат

В связи с тем, что при целом ряде заболеваний часто имеет место выраженная лейкопения, когда исследование лейкоцитарной формулы и обнаружение патологических элементов (например, бластов при острых лейкозах, миеломных клеток при миеломе и др.) затруднено, целесообразно приготовление лейкоконцентрата.

Все существующие методики лейкоконцентрации основаны на: 1) гемолизе эритроцитов, 2) центрифугировании и 3) седиментации. Наиболее физиологичны методики, основанные на седиментации форменных элементов крови.

Методика лейкоконцентрации с гепарином

Рекомендуется при необходимости удаления тромбоцитов.

Принцип. При центрифугировании плазмы, разведенной холодным изотоническим раствором натрия хлорида, тромбоциты оседают, а лейкоциты остаются во взвешенном состоянии в плазме.

Реактивы: 1) гепарин, 500 ЕД/мл; 2) 0,85% раствор натрия хлорида; 3) краска Романовского–Гимзы или азур-эозин; 4) метанол для фиксации мазков.

Ход исследования. В пробирку с 1 мл гепарина вносят 4 мл венозной крови, перемешивают переворачиванием пробирки. Отстаивают в течение 40–45 мин. Пастеровской пипеткой (можно автоматической) осторожно, стараясь не захватить эритроциты, отбирают плазму и переносят в центрифужную пробирку. Центрифугируют при 1500 об./мин в течение 10 мин. Удаляют надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 5 мл холодного 0,85% раствора натрия хлорида. Центрифугируют при 500–800 об./мин 10–15 мин. Если в осадке имеется примесь эритроцитов, необходимо повторно промыть и отцентрифугировать осадок с холодным раствором натрия хлорида. Из осадка готовят мазки, фиксируют и окрашивают их по общепринятым гематологическим методикам.

Методика концентрации лейкоцитов с использованием трилона Б

Принцип. В результате ускорения оседания эритроцитов при добавлении в кровь раствора трилона Б получается плазма, содержащая лейкоциты.

Реактивы. 1) 3% раствор трилона Б (этилендиаминтетраацетат натрия, ЭДТА); 2) краска Романовского–Гимзы или азур-эозин; 3) метанол.для фиксации мазков.

Ход исследования. В пробирку с 1 мл 3% раствора трилона Б вносят 4 мл венозной крови, осторожно перемешивают, наклоняя пробирку, ставят в термостат при 37 °С или оставляют при комнатной температуре на 30–45 мин. За это время над эритроцитами отстаивается слой плазмы в 2–3 мл. Пастеровской пипеткой (можно автоматической), стараясь не захватить эритроциты, отсасывают плазму и вносят в центрифужную пробирку. Центрифугируют при 1000 об./мин в течение 10 мин. Удаляют надосадочную жидкость, на предметное стекло пастеровской пипеткой наносят каплю осадка, готовят из нее мазок, фиксируют и окрашивают его по общепринятым гематологическим методикам.

Клиническое значение. Существенное преимущество исследования окрашенного мазка лейкоконцентрата перед исследованием мазков периферической крови имеет при острых лейкозах, особенно в алейкемической стадии, при лимфогранулематозе, миеломной болезни и др. Оно позволяет выявить бластные клетки, оценить полноту ремиссии при остром лейкозе. Кроме того, лейкоконцентрат используют для проведения цитохимических исследований, имеющих большое диагностическое значение при острых лейкозах.

При миелопролиферативных заболеваниях, особенно при доброкачественном сублейкемическом миелозе, в мазках лейкоконцентрата обнаруживаются ядра мегакариоцитов. При лимфогранулематозе, миеломной болезни выявляется повышенное содержание плазматических клеток. При лимфогранулематозе могут быть найдены предстадии клеток Березовского–Штернберга. Важную роль играет исследование лейкоконцентрата при системной красной волчанке для выявления LE-клеток.