Исследование крови
Кислая α-нафтилацетатэстераза. Методика Кулленкампфа (J. Kullenkampf) и др.
Кислая α-нафтилацетатэстераза, главным образом, локализуется в лизосомах цитоплазмы клеток и активирует гидролиз алифатических эфиров.
Принцип. В кислой среде из α-нафтилацетата при действии фермента образуется свободный нафтол, дающий красное окрашивание.
Реактивы.
- 2,5% раствор глутаральдегида, pH 7,2;
- 4% раствор солянокислого фуксина;
- 4% раствор нитрата натрия;
- 0,7 М фосфатный буфер, pH 5,0;
- α-нафтилацетат;
- 2% раствор метилового зеленого;
- ацетон;
- инкубационная среда: по 2%1л реактивов 2 и 3; 40 мл реактива 4; 10 мг α-нафтилацетата, растворенного в 0,4 мл ацетона. Готовится перед употреблением. pH среды должен быть 5,8.
Ход исследования. Нефиксированные мазки можно хранить в холодильнике до 2 месяцев. Сухие мазки фиксируют в 2,5% растворе глутаральдегида при температуре 4 °С в течение 10 мин. Промывают дистиллированной водой. Инкубируют в инкубационной среде при комнатной температуре 1,5–6,0 ч. Промывают дистиллированной водой. Докрашивают 2% раствором метилового зеленого.
Нормальные величины. Фермент выявляется в виде темно-красных гранул в цитоплазме лимфоцитов, в нейтрофилах и моноцитах в виде диффузной окраски. СЦК лимфоцитов равен 0,57.
Увеличение времени инкубации приводит к увеличению выявляемой активности фермента.
Клиническое значение. Активность фермента снижена в лимфоцитах при В-клеточном варианте хронического лимфолейкоза. При Т-клеточных пролиферациях активность фермента в лимфоцитах повышается.
См. также:
