Сукцинатдегидрогеназа. Методика Нахласа (М. М. Nachlas) и др. в модификации Р. Н. Нарциссова

Принцип. Активность СДГ оценивается по количеству нерастворимого диформазана синего цвета, образующегося при реакции восстановления солей тетразолия.

Реактивы.

  1. 60% раствор ацетона, насыщенный трилоном Б;
  2. 1/15 М фосфатный буфер с pH 7,2;
  3. натрия сукцинат;
  4. паранитротетразолий фиолетовый;
  5. трилон Б (этилендиаминтетраацетат натрия, ЭДТА);
  6. 0,5% раствор метилового зеленого на ацетатном буфере, pH 5,0;
  7. инкубационная среда: 540 мг сукцината натрия растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл фосфатного буфера с pH 7,2 и 10 мл раствора паранитротетразолия в дистиллированной воде (1 мг/мл), 13 мг трилона Б, устанавливают pH смеси 7,2 и доводят объем дистиллированной водой до 40 мл. Инкубационная среда пригодна при хранении в холодильнике в течение 2 нед.

Ход исследования. Мазки фиксируют 60% раствором ацетона при комнатной температуре в течение 30 с. Ополаскивают дистиллированной водой 3–5 с и высушивают на воздухе. Инкубируют в инкубационной среде при 37 °С в течение 60 мин. Промывают проточной водой 1 мин, ополаскивают дистиллированной водой 3–5 с. Докрашивают красителем метиловым зеленым в течение 5–10 мин. Промывают проточной водой. Высушивают на воздухе. Для предотвращения растворения формазана в иммерсионном масле мазки дополнительно фиксируют парами формалина (40% раствор формальдегида) в течение 30 мин.

См. также: