Исследование крови
Методика Шабадаша
Принцип. Перйодат калия окисляет гликоген с образованием альдегидных соединений, легко реагирующих с реактивом Шиффа (фуксин-сернистая кислота). В местах локализации гликогена выявляется вишнево-фиолетовое окрашивание.
Реактивы.
- 0,03 М раствор перйодата калия или натрия: 230 мг перйодата калия растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Готовят перед употреблением;
- 1 н. раствор соляной кислоты: 82,5 мл концентрированной HCl с относительной плотностью 1,19 доводят до 1 л дистиллированной водой;
- основной фуксин (для фуксин-сернистой кислоты);
- метабисульфит калия (K2S2O5);
- реактив Шиффа: 1 г основного фуксина растворяют в 200 мл кипящей дистиллированной воды. По мере охлаждения в раствор добавляют 1 г метабисульфита калия и 20 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Оставляют на сутки. Для полного обесцвечивания раствора в него добавляют 1 растолченную таблетку активированного угля (карболена), отстаивают в течение суток, затем фильтруют. Хранят в темноте в плотно закрытой емкости, лучше на холоде. Раствор годен в течение нескольких месяцев. О непригодности свидетельствует легкое покраснение раствора;
- 10% раствор метабисульфита калия;
- сернистая вода: к 10 мл 10% раствора метабисульфита калия добавляют 200 мл дистиллированной воды и 10 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Готовят перед использованием;
- 0,1% спиртовой раствор светло-зеленой краски (Лихтгрюна);
- абсолютный этиловый спирт.
Ход исследования. Сразу же после приготовления препараты фиксируют в абсолютном этаноле в течение 30 мин. Дважды промывают дистиллированной водой. На 20 мин погружают в раствор перйодата (в темноте). Трижды промывают дистиллированной водой. В течение 1–2 мин ополаскивают сернистой водой. Затем окрашивают реактивом Шиффа 30–40 мин (в темноте). Промывают в трех сменах дистиллированной воды, каждый раз по 3 мин. Окрашивают светло-зеленой краской 10–20 с. Промывают дистиллированной водой. Гликоген окрашивается в вишнево-фиолетовый цвет на зеленоватом фоне препарата .
ШИК-реакция нейтрофилов
