Определение количества белка в моче по реакции с сульфосалициловой кислотой

Принцип метода. Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 1) 3% раствор сульфосалициловой кислоты (C7H5O6S); 2) 0,9% раствор NaCl; 3) 1% стандартный раствор альбумина: 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.

Ход определения. В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590–650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 нм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построения которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу: Приготовление разведений для построения калибровочного графика).

Приготовление разведений для построения калибровочного графика

№ пробирки Стандартный раствор, мл 0,9% NaCl, мл Концентрация белка, г/л
1 0,05 9,95 0,05
2 0,1 9,9 0,1
3 0,2 9,8 0,2
4 0,5 9,5 0,5
5 1,0 9,0 1,0

Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Примечание. Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгеноконтрастных соединений. Ложноположительные реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

См. также: