Биуретовый метод

Принцип метода. Пептидные связи белка с солями меди в щелочной среде образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой (ТХУ).

Реактивы. 1) 10% раствор ТХУ; 2) 20% раствор сульфата меди (CuSO4 × 5Н2O); 3) 3% раствор NaOH.

Ход определения. К 5 мл мочи прибавляют 3 мл 10% раствора ТХУ, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, а осадок растворяют в 1 мл 3% раствора NaOH и добавляют 0,25 мл 20% раствора CuSO4, смесь перемешивают и центрифугируют. Центрифугат фотометрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, который строят так же, как описано в предыдущем методе. На оси абсцисс откладывают оптическую плотность в единицах экстинкции, а на оси ординат — концентрацию белка в г/л. При анализе суточной мочи рассчитывают потерю белка за сутки.

См. также: