Методика азосочетания Берстона в модификации Ю. Ф. Руденса и И. М. Буйкиса

Принцип. Фермент, содержащийся в специфических гранулах цитоплазмы, расщепляет α-нафтил фосфат с высвобождением α-нафтола, образующего с солями диазония (прочный голубой или прочный фиолетовый) нерастворимый осадок коричневого цвета.

Реактивы.

  1. 0,1 М раствор нитратного буфера с pH 5,2;
  2. 0,05 М раствор магния хлорида (MgCl2);
  3. нафтол-AS-фосфат. Можно использовать нафтол-AS-TR-фосфат или нафтол-AS-В1-фосфат;
  4. диметилформамид;
  5. диазоль синий 2С или прочный зеленый ВВ;
  6. краситель Романовского—Гимзы;
  7. изотонический (0,85%) раствор натрия хлорида;
  8. инкубационная среда: 10 мг нафтол-AS-фосфата, растворенного в 5 мл диметилформамида; 15 мл 0,1 М цитратного буфера с pH 5,2; 45 мл дистиллированной воды; 5 мл раствора магния хлорида; 50 мг диазоля синего. Готовят перед употреблением, используют после фильтрования.

Ход исследования. Нефиксированные мазки инкубируют в инкубационной среде при 37 °С в течение 2 ч. Промывают изотопическим раствором натрия хлорида. Докрашивают красителем Романовского—Гимзы. Промывают в проточной воде. Фермент выявляется в виде гранул синего цвета.

См. также: