Исследование крови
гостиница улица Коптевская читать далее | фундамент под ключ цены | прием лома
Методика азосочетания Берстона в модификации Ю. Ф. Руденса и И. М. Буйкиса
Принцип. Фермент, содержащийся в специфических гранулах цитоплазмы, расщепляет α-нафтил фосфат с высвобождением α-нафтола, образующего с солями диазония (прочный голубой или прочный фиолетовый) нерастворимый осадок коричневого цвета.
Реактивы.
- 0,1 М раствор нитратного буфера с pH 5,2;
- 0,05 М раствор магния хлорида (MgCl2);
- нафтол-AS-фосфат. Можно использовать нафтол-AS-TR-фосфат или нафтол-AS-В1-фосфат;
- диметилформамид;
- диазоль синий 2С или прочный зеленый ВВ;
- краситель Романовского—Гимзы;
- изотонический (0,85%) раствор натрия хлорида;
- инкубационная среда: 10 мг нафтол-AS-фосфата, растворенного в 5 мл диметилформамида; 15 мл 0,1 М цитратного буфера с pH 5,2; 45 мл дистиллированной воды; 5 мл раствора магния хлорида; 50 мг диазоля синего. Готовят перед употреблением, используют после фильтрования.
Ход исследования. Нефиксированные мазки инкубируют в инкубационной среде при 37 °С в течение 2 ч. Промывают изотопическим раствором натрия хлорида. Докрашивают красителем Романовского—Гимзы. Промывают в проточной воде. Фермент выявляется в виде гранул синего цвета.
См. также: