Исследование крови
Нафтол-AS-D-хлорацетатэстераза. Методика Молони и др. ( М. С. Moloney et. al)
Принцип определения активности фермента такой же, как и при определении активности α-нафтолацетатэстеразы.
Реактивы.
- 10% раствор формальдегида в метаноле (хранят в холодильнике);
- буферный раствор Михаэлиса с pH 7,4;
- нафтол-AS-D-хлорацетат;
- ацетон;
- гранатовый прочный JBC или синий прочный ВВ;
- краситель для ядер;
- инкубационная среда: 10 мг нафтол-AS-D-хлорацетата, растворенного в 0,5 мл ацетона; 10 мл буферного раствора Михаэлиса, разведенного в 2 раза дистиллированной водой; 10 мг реактива 5; быстро встряхивают во избежание выпадения осадка, фильтруют.
Ход исследования. Свежеприготовленные и высушенные на воздухе мазки фиксируют в холодном 10% растворе формальдегида в метаноле 30 с, затем высушивают. Фиксированные препараты можно хранить несколько месяцев. Инкубируют в инкубационной среде при комнатной температуре в течение 30 мин. Промывают проточной водой. Докрашивают красителем для ядер.
Нормальные величины. Фермент выявляется в виде синих или фиолетовых гранул в цитоплазме сегментоядерных нейтрофилов. Лимфоциты и моноциты фермента не содержат. В мазках пунктата костного мозга наибольшую активность фермент проявляет в промиелоцитах. По мере созревания гранулоцитов активность α-нафтол-AS-D-хлорацетатэстеразы несколько снижается.
Клиническое значение. Активность фермента повышается в бластных клетках при остром промиелоцитарном лейкозе; низкая активность фермента отмечается при остром монобластном лейкозе. При других формах острых лейкозов в бластных клетках активность не выявляется.
См. также:
