Методика определения фетального гемоглобина по Бетке

Принцип. Элюция гемоглобина кислотой с докрашиванием мазков позволяет выявить эритроциты, содержащие гемоглобин F, по сохраненной окраске в отличие от обесцвеченных эритроцитов, содержащих гемоглобин А.

Реактивы. 1) цитратно-фосфатный буфер с pH 3,2: 24,7 мл 0,2 М раствора кристаллогидрата гидрофосфата натрия (35,6 г Na2HPO4 × 2Н2O и дистиллированная вода до 1 л) и 75,3 мл 0,1 М раствора лимонной кислоты (21,01 г лимонной кислоты и дистиллированная вода до 1 л); 2) 1% раствор метилового фиолетового или 1% раствор эозина; 3) 80% этиловый спирт.

Ход определения. Мазки крови фиксируют в течение 5 мин в 80% этаноле, промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. На 5 мин погружают в прогретый при 37 °С в течение 30 мин цитратно-фосфатный буфер (для элюции гемоглобина), периодически помешивая раствор стеклянной палочкой для удаления пузырьков воздуха. Ополаскивают дистиллированной водой, высушивают фильтровальной бумагой. Докрашивают раствором метилового фиолетового или эозина в течение 2–3 мин. Лучшие результаты дает окрашивание метиловым фиолетовым. Промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

Нормальные величины. У взрослых встречаются единичные окрашенные эритроциты, содержащие гемоглобин F; увеличенное количество окрашенных эритроцитов наблюдается у новорожденных и детей до 5-месячного возраста.

Клиническое значение. Увеличение числа эритроцитов, содержащих гемоглобин F, наблюдается у больных с β-талассемией, особенно при гомозиготной форме, встречается при различных формах малокровия: других гемолитических анемиях, железодефицитной анемии, гипопластической анемии, лейкозах и других состояниях, сопровождающихся гипоксией.

См. также: