Качественная методика Мотульского–Кемпбеля

Принцип. Г-6-ФДГ является НАДФ-зависимым ферментом, в первой реакции окислительной фазы пентозофосфатного пути окисления глюкозы при ее участии образуется НАДФН, восстанавливающий (обесцвечивает) бриллиантовый крезиловый синий.

Реактивы:

  • раствор натриевой соли глюкозо-6-фосфата: 825 мг в 100 мл дистиллированной воды;
  • раствор НАДФ: 50 мг в 100 мл дистиллированной воды;
  • раствор бриллиантового крезилового синего: 32 мг в 100 мл дистиллированной воды;
  • трис-HCl-буфер с pH 8,5: 8,96 г трис(оксиметил)аминометана, 97 мл дистиллированной воды, 3 мл концентрированной соляной кислоты;
  • парафин.

Ход исследования. В пробирку вносят 0,1мл реактива 2, 0,25 мл реактива 3, 0,2 мл реактива 4, перемешивают. В другую пробирку, куда предварительно налит 1 мл дистиллированной воды, вносят 0,02 мл крови из пальца (при анемии крови берут 0,04–0,06 мл). Смешивают содержимое обеих пробирок, смесь заливают 1–2 мл жидкого парафина, помещают ее в водяную баню при 37 °С и отмечают время обесцвечивания смеси.

Нормальные величины. У здоровых людей смесь обесцвечивается через 40–55 мин.

Клиническое значение. Замедление времени обесцвечивания смеси более 90 мин свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. При гемолитической энзимодефицитной анемии обесцвечивание наступает через 3–24 ч.

См. также: