Качественная методика по Бернштейну

Принцип. В присутствии Г-6-ФДГ образуется НАДФН, восстанавливающий (обесцвечивает) дихлорфенилиндофенол.

Реактивы: 1) раствор 2,6-дихлорфенилиндофенола: 14,5 мг в 100 мл трис-HCl-буферного раствора с pH 8,0. Буферный раствор состоит из 1,48 М раствора трис(оксиметил)аминометана (43,27 г в 250 мл дистиллированной воды) и 1,48 М раствора соляной кислоты (2 ампулы фиксанала, содержащего 0,1 моль-экв НСl, доводят дистиллированной водой до 135 мл). К 230 мл раствора триса добавляют 110 мл раствора соляной кислоты и доводят дистиллированной водой до 460 мл; 2) раствор феназинметасульфата: 2 мг в 100 мл дистиллированной воды; 3) раствор НАДФ: 2,3 мг в 1 мл дистиллированной воды; 4) раствор глюкозо-6-фосфата: 15,2 мг натриевой соли Г-6-Ф в 1 мл дистиллированной воды.

Из этих растворов готовят смесь реактивов: реактив 1 — 16 частей, реактив 2 — 2 части, реактив 3 — 1 часть и реактив 4 — 1 часть.

Ход исследования. В пробирку с 1 мл дистиллированной воды вносят 0,02 мл крови из пальца. После наступления гемолиза добавляют 0,5 мл смеси реактивов, оставляют при комнатной температуре на 15–20 мин, после чего оценивают изменение цвета окраски.

Нормальные величины. У здоровых людей обесцвечивание смеси происходит через 15–20 мин.

Клиническое значение. Удлинение времени обесцвечивания свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. Неполное обесцвечивание за 30 мин соответствует незначительному уменьшению активности фермента, а отсутствие обесцвечивания к этому времени — резкому ее снижению.

См. также: