Осмотическая резистентность эритроцитов

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют их резистентность к различным воздействиям. Наиболее часто в практике определяют осмотическую резистентность эритроцитов. Различают минимальную и максимальную резистентность. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического (менее 0,85%) раствора натрия хлорида (в серии постепенно уменьшающихся концентраций), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе 3 ч. Максимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов.

Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л. И. Идельсона

Принцип. Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах натрия хлорида.

Реактивы: основной раствор (по осмотической концентрации соответствует 10% раствору натрия хлорида), pH 7,4: натрия гидрофосфат безводный (Na2HPO4) — 27,31 г или кристаллогидрат (Na2HPO4 × 2Н20) — 34,23 г; натрия дигидрофосфат кристаллогидрат (NaH2PO4 × 2Н2O) — 4,86 г: натрия хлорид — 180 г; дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодильнике несколько месяцев.

Основной раствор разводят в 10 раз дистиллированной водой и получают раствор, по осмотической концентрации соответствующий 1% раствору натрия хлорида. Из этого раствора готовят рабочие растворы, соответствующие растворам натрия хлорида следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%%. Целесообразно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов. Хранят в холодильнике, пригодны они в течение 2 нед.

Специальное оборудование: 1) фотоэлектроколориметр; 2) термостат на 37 °С.

Ход определения. В две стерильные пробирки с 2 каплями гепарина (500 ЕД) вносят по 1,5 мл крови, перемешивают и одну используют для иссле дования, а вторую оставляют на сутки в термостате. В ряд центрифужных пробирок (14 шт.) разливают по 5 мл каждого из рабочих растворов с концентрацией натрия хлорида от 1 до 0,10%. В каждую пробирку добавляют по 0,02 мл гепаринизированной крови и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Центрифугируют смесь при 2000 об./мин в течение 5 мин. Из каждой пробирки сливают надосадочную жидкость и фотометрируют при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы.

Контрольная проба — надосадочная жидкость в пробирке, содержащей рабочий раствор с концентрацией натрия хлорида 1%.

Расчет. За полный (100%) гемолиз принимают гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величину экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, принятой за 100 %, по формуле:

где Е1 — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида; Ех — экстинкция исследуемой пробы; 100 — полный гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной в течение 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины. У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации натрия хлорида 0,50–0,45 %, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40–0,35% растворе натрия хлорида.

Клиническое значение. Данное исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Наименее устойчивы к гипотоническим растворам сфероциты (появление гемолиза эритроцитов отмечено при более высоких концентрациях натрия хлорида 0,75–0,70 %). Понижение осмотической устойчивости наблюдается не только при наследственном микросфероцитозе, но и при некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, при аутоиммунной гемолитической анемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов характерно для талассемии, гемоглобинопатии, возможно при механической желтухе.

См. также: