Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Принцип основан на флюоресценции зернистосетчатой субстанции ретикулоцитов после обработки крови акридиновым оранжевым.

Реактивы: 1) раствор акридинового оранжевого на изотоническом растворе натрия хлорида, концентрация 1 : 5000. Для приготовления изотонического раствора рекомендуется использовать дистиллированную воду с pH 5,8–6,8. Раствор акридинового оранжевого должен быть свежим. Его хранят не более 3–5 дней в посуде из темного стекла с притертой пробкой; 2) нефлюоресцирующее иммерсионное масло. Можно использовать афлуоль или обычное иммерсионное масло с флюоресценцией, погашенной нитробензолом (0,3 мл нитробензола на 1 мл масла). Ю. Н. Зубжицкий в качестве нефлюоресцирующего масла предлагает использовать перегнанный анизол.

Специальное оборудование: Люминесцентный микроскоп.

Ход определения. Кровь смешивают с акридиновым оранжевым в пробирке или смесителе в соотношении: 1 часть крови и 10 частей краски (смесь хранят не более 5 ч). Смесь перемешивают в течение 2 мин, каплю смеси наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Микроскопируют со светофильтром ЖС-17. В препарате эритроциты не флюоресцируют, а в ретикулоцитах зернисто-сетчатая субстанция светится ярко-красным цветом. Замечено, что в крови, стабилизированной гепарином или цитратом натрия, флюоресценция ретикулоцитов не наблюдается. Методика отличается простотой и требует немного времени, благодаря яркому свечению ретикулоциты легко сосчитать.

См. также: