Методика азосочетания в модификации М. Г. Шубича

Принцип. Фермент, содержащийся в специфических гранулах цитоплазмы, расщепляет α-нафтил фосфат с высвобождением α-нафтола, образующего с солями диазония (прочный голубой или прочный фиолетовый) нерастворимый осадок коричневого цвета.

Реактивы.

  • 0,5% раствор целлоидина в смеси равных объемов абсолютного этилового спирта и медицинского эфира;
  • 0,5 М раствор натрия тетрабората с pH 9,18: 19,1 г тетрабората натрия (бура) растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем водой до 1 л. Раствор стоек при хранении;
  • 0,1% раствор α-нафтилфосфата в растворе тетрабората натрия. Готовят перед использованием;
  • 0,2% раствор диазоля синего 0 в растворе тетрабората натрия. Готовят перед использованием, фильтруют в защищенном от света месте;
  • гематаль 8 Бейкера; один объем 0,1% раствора гематеина, приготовленного на 50% водном растворе этиленгликоля, смешивают с одним объемом 1,6% раствора сульфата алюминия. Вместо гематаля можно использовать гематоксилин Майера (приготовление раствора гематоксилина описано в предыдущей методике);
  • инкубационная среда: равные количества реактивов 3 и 4. Готовят перед использованием.

Ход определения. Мазки фиксируют в 0,5% растворе целлоидина 3–5 секунд. После фиксации мазка салфеткой удаляют целлоидин с обратной стороны предметного стекла; стекла ставят на фильтровальную бумагу в вертикальном положении и высушивают. Затем инкубируют в инкубационной среде при комнатной температуре в темном месте в течение 30 мин. Промывают проточной водой 5–10 мин и ополаскивают дистиллированной водой. Ядра клеток докрашивают красителем (реактив 5). При окраске гематалем 8 мазки выдерживают 18—24 ч, затем промывают в дистиллированной воде и высушивают. При использовании гематоксилина мазки окрашивают 30–60 мин; ополаскивают тетраборатным буфером, разведенным водой; промывают дистиллированной водой и высушивают.

См. также: