Методика Грэхема–Кнолля

Принцип. В присутствии пероксидазы бензидин окисляется перекисью водорода в оксибензидин, окрашивающий место локализации фермента в цвет от синего до коричневого.

Реактивы. 1) 4% формалиново-спиртовой раствор: 1 часть 40% раствора формальдегида (формалин) и 9 частей 96% этилового спирта; 2) реактив на пероксидазу: 200 мг бензидина дигидрохлорида или орто-толуидина растворяют в 6 мл 96% этилового спирта, прибавляют 4 мл дистиллированной воды. Хорошо взбалтывают. Часть орто-толуидина может остаться в осадке; 3) перед употреблением к 10 мл полученного раствора добавляют 1–2 капли (не более!) 3% раствора перекиси водорода; 4) краска Романовского—Гимзы.

Ход исследования. Используются свежие мазки или отпечатки крови. Пероксидаза нестабильна на свету, но при хранении в темноте нефиксированные мазки пригодны для исследования в течение 3 нед. В качестве антикоагулянта могут использоваться гепарин, оксалат натрия, ЭДТА.

Свежие мазки (1–2-дневной давности) фиксируют 10–15 секунд в 4% формалиново-спиртовом растворе. Промывают в несильной струе проточной воды, высушивают. Заливают реактивом на пероксидазу (свежеприготовленным, с только что добавленной перекисью водорода) на 10–15 мин. Тщательно промывают в проточной воде в течение 1—2 мин, высушивают. Докрашивают краской Романовского–Гимзы. Пероксидаза выявляется в цитоплазме клеток в виде коричневых гранул при использовании бензидина или желто-оранжевых при использовании орто-толуидина.

См. также: