Методика Кеплоу

Принцип определения активности фермента тот же, что и в Методике Грэхема—Кнолля

Реактивы: 1) фиксирующий раствор: 40 мл 40% раствора формальдегида (формалин) и 90 мл абсолютного этанола; 2) реактив на пероксидазу: 100 мл 30% раствора этанола; 0,3 г бензидина дигидрохлорида; 1мл 0,132 М раствора цинка сульфата (ZnSO4 × 7Н2O); 1 мл 3,8% раствора натрия ацетата (CH3COONa × ЗН2O); 1,5 мл 3% раствора перекиси водорода; 1,5 мл 1 н. раствора гидроксида натрия (NaOH); 0,2 г сафранина. Ингредиенты перемешивают, сульфат цинка образует преципитаты, которые растворяются после добавления остальных реагентов. pH смеси должен быть в пределах 5,8–6,5. Раствор фильтруют и хранят в посуде из темного стекла в течение нескольких месяцев; 3) краситель Романовского–Гимзы или 1% водный раствор крезилового фиолетового.

Ход исследования. Мазки помещают в фиксирующий раствор на 60 секунд при комнатной температуре. Промывают проточной водой. Помещают в реактив на пероксидазу на 30 секунд при комнатной температуре, промывают проточной водой 30–60 с. Высушивают и докрашивают краской Романовского–Гимзы или крезиловым фиолетовым. Места локализации пероксидазы (гранулы) окрашиваются в синий цвет, ядро и фон — в красный цвет.

См. также: